文件名称：融合蛋白IL6-OmpW的质粒构建及表达纯化 (2013年)
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更新时间：2024-06-04 19:12:27
自然科学 论文
以重组质粒pMD18-T/IL6 和pMD18-T/OmpW 为模板，分别扩增红笛鲷IL-6 基因和哈维氏弧菌外膜蛋白OmpW 基因，运用PCR 重叠延伸剪切技术，将IL-6 和OmpW 基因融合，将融合基因定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导融合蛋白高效表达，融合蛋白分子质量约为66.6 ku。优化后表达条件为温度37 ℃，IPTG 浓度0.2 mmol ・ L-1，诱导时间5 h。用HisTrap? HP 亲和