文件名称：人肠激酶轻链基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 (2008年)
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更新时间：2024-05-27 01:19:40
自然科学 论文
研究目的:克隆表达人肠激酶轻链编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化。方法:从人的全基因组中扩增出编码人肠激酶轻链的5个外显子基因片段,经过酶切、连接后得到正确编码的人肠激酶轻链完整基因序列;随后,将目的基因片段插入原核表达载体pBV220中,构建成融合型表达载体pBV-EKL,转化大肠杆菌BL21(DE3),调节温度至42℃诱导重组蛋白表达;通过镍亲和层析纯化得到重组蛋白。结果:所表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,相对表观分子质量约为31 kDa,表达量占菌体总可溶蛋白量的46%; 通过镍亲和层析