文件名称：豹蛙酶的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达 (2010年)
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更新时间：2024-06-02 05:29:40
工程技术 论文
根据豹蛙酶的氨基酸序列，采用大肠杆菌偏爱密码子设计引物，重叠延伸PCR法合成出目的基因，约350 bp。将得到的片断克隆于载体pGEM-T中并测序，再连接至表达载体pET-22b(+)中，重组质粒转入大肠杆菌 Rosetta中。转化的重组大肠杆菌用终浓度1 mmokL的IPTG诱导外源基因表达，采用Tricine-SDS-PAGE系统，分析目标蛋白主要以包涵体形式存在，其质量分数可达48．8％。利用液相电喷雾串联质谱方式(LC-ESI-MS／MS)鉴定蛋白，通过LCQ DECA XP Plus系统进行蛋白