文件名称：E.coli+M15碱性磷酸酶的表达、纯化及活性分析
文件大小：820KB
文件格式：PDF
更新时间：2017-05-03 13:28:05
碱性磷酸酶
目的：克隆、表达并纯化大肠杆菌M15碱性磷酸酶(EAP)成熟肽(phoA)，分析其活性。方法：采用PCR技术从M15基 因组DNA中扩增出phoA编码基因；构建其原核表达载体pCold—TF—EAP；转入E洲f BL21(DE3)进行表达；IMAc Ni—NTA柱 层析法纯化重组蛋白；重组蛋白与底物对硝基苯磷酸二钠显色反应分析其活性。结果：克隆得到了序列约1 400 bp phoA编码基 因，原核表达了分子量约为100 kDa的融合重组EAP(rEAP)，纯化获得的rEAP具有催化磷酸单酯的活性，有效反应温度范围大， 在27℃一67℃都具有较高的催化活性，在pH 7．5—8．0间催化活性最高。结论：克隆了可正确表达EAP的phoA编码基因，为 EAP的工业化生产及应用提供了生物材料。