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文件名称：山蛭素(haemadin)在毕赤甲醇酵母中的表达及其性质鉴定 (2005年)
文件大小：5.97MB
文件格式：PDF
更新时间：2021-05-12 23:08:10
自然科学 论文
人工合成山蛭素基因后，利用基因重组的方法将山蛭素的基因克隆到pPicZ以载体，经过线性化，电转至毕赤酵母GS115中表达。使用浓度高达1500μg/mL的zeocin筛选得到高拷贝插入的GS115-H菌株，经过优化摇瓶表达条件表达量达到100mg/L。摇瓶培养物经离心取上清，分别使用3kD和10kD的超滤膜超滤，阳离子交换层析和凝胶过滤层析等纯化步骤之后，得到纯度高于95%的目的蛋白，产出量为40 mg/L，回收率为40%。通过以chromozym TH为底物的凝血酶酰胺水解实验证实了其体外生物学活性：其