文件名称：产黄青霉苯乙酰CoA连接酶基因phl的克隆表达及其纯化酶的性质分析 (2011年)
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更新时间：2024-07-03 06:38:35
工程技术 论文
苯乙酸与CoA反应,生成苯乙酰CoA,利用RT-PCR方法成功地从产黄青霉中扩增得到1737 bp不含内含子的phl基因,并将其克隆到pET30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3 )中低温诱导表达。经SDS-PAGE检测分析,获得与预期大小(62 .1 kDa )一致的蛋白表达特异条带。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化了重组酶,经检测苯乙酸的吸收,表明纯化酶对苯乙酸和CoA有明显的催化活性,酶活为1680 U/ mL。研究表明,纯化酶PCL最适宜温度为30℃,有一定的热稳定性,最适宜pH值为8.0