文件名称：环亚酰胺水解酶在大肠杆菌中的重组表达与纯化 (2008年)
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更新时间：2024-06-01 20:00:19
自然科学 论文
以重组质粒pEI为模板，PCR扩增环亚酰胺酶基因序列，插入pMAL-S表达载体中。重组质粒转入E. ColiBL21（DE3）后，经IPTG诱导可溶性表达融合蛋白MBP-CIH，利用Amylose亲和柱一步纯化获得MBP-CIH，再经人鼻病毒3C蛋白酶切除亲和臂MBP，硫酸铵沉淀、Phenyl-sepharose疏水层析获得电泳纯的CIH，纯化倍数为12.7，活力回收29%，比活为36.3U/mg。重组环亚酰胺水解酶的最适pH为8.0～9.0，最适温度50℃，在温度低于55℃时酶的性质相对稳定。Ni2+、