小鼠OB基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达 (2006年)

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文件名称：小鼠OB基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达 (2006年)
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更新时间：2021-06-14 03:25:59
自然科学 论文 利用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织中扩增了OB基因，并利用定向克隆技术克隆至原核表达载体pTO-T7．将构建好的质粒导入表达型大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达，并对表达产物进行Western-blot检测．表达产物利用亲和层析技术进行纯化．结果显示：表达的带有his标签的小鼠leptin融合蛋白，分子量约为20 ku．0.5 mmol/L的IPTG在37℃诱导2.5 h时，leptin融合蛋白的表达量达到最大，达菌体总蛋白50％以上．表达产物经过纯化，纯度可达90％以上．Westernblot