文件名称：克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定 (2011年)
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更新时间：2024-06-06 22:14:28
自然科学 论文
克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因，表达并纯化该蛋白，检测其免疫原性。提取克氏原螫虾总RNA，设计特异性引物，RT-PcR克隆得到目的基因；将目的基因连人pMDl9-T载体，提质粒酶切鉴定并测序；将测序正确的片段连人原核表达载体pET-32a（+）上，并转入BL21（DE3）宿主表达菌中；IPTG诱导表达；通过Ni2+亲和层析（FPLC）纯化目的蛋白；利用westem-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性。克隆获得目的基因，其片段长为291 bp，编码97个氨基酸。重组蛋白