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文件名称：猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗*备 (2015年)
文件大小：1.09MB
文件格式：PDF
更新时间：2021-05-13 22:26:04
自然科学 论文
目的克隆猪Jiv蛋白核心区的2 112 bp的基因片段,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达和纯化,制备抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体.方法利用RT-PCR方法,从猪脾脏组织RNA中扩增得到猪Jiv基因,将其克隆到pMD19-T载体并测序,以此为基础构建原核表达载体pET32a-Jiv,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导表达,获得大量包涵体形式的猪Jiv融合蛋白。通过镍离子螯合层析柱对表达的目的蛋白进行纯化,对纯化后的包涵体蛋白进行透析复性,以每只新西兰白兔400 μg蛋白