构建T载体用于PCR克隆 (2005年)

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文件名称：构建T载体用于PCR克隆 (2005年)
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更新时间：2021-05-20 10:55:44
自然科学 论文 通过克隆甘露聚糖酶基因到pMD一18T载体构建了质粒pMD-18Tman2XcmI，克隆的甘露聚糖酶基因两侧各引进了一个特定的XcmI酶切位点；用XcmI酶切质粒pMD-18Tman2XemI可以制备T载体。因为甘露聚糖酶基因作为填充片段和筛选标记受半乳糖苷酶基因启动子的控制，甘露聚糖酶能够表达，从而水解甘露聚糖产生水解圈，指示转化了部分酶切质粒的背景菌落。此外，在甘露聚糖酶基因中存在第3个不同序列的。XcmI酶切位点，因此残余的甘露聚糖酶基因引起的背景可以进一步降低。抽提大量质粒贮存，随时制备T载体使用