文件名称：抗人红细胞单链抗体基因的构建及表达 (2000年)
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更新时间：2024-05-14 11:32:25
自然科学 论文
从分泌抗人红细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞3F5中提取总RNA，逆转录成cDNA，用合成的寡核苷酸引物通过PCR扩增和克隆单抗的轻、重链可变区基因，用双脱氧核苷酸链终止法分析核苷酸序列，采用PCR拼接法构建单链抗体基因，并插入原核表达栽体PEt-28a，转化大肠杆菌 BL21(DE3)，经IPTG诱导后表达.序列分析表明所克隆的VL、VH分别属于鼠Ig Kappa轻链IV亚组和Ig重链Ⅱ亚组.VH、VL基因均含正确的框架结构，构建的单链抗体基因全长750 bp，在原核系统中的表达产物经SDS-PAGE分析相对