植物叶片叶绿素含量测定
- 1.植物叶绿素测定目的和原理
- 2. 80%丙酮提取液
- 3. 95%以纯提取液
1.植物叶绿素测定目的和原理
植物叶绿素含量直接影响植物的光合作用和作物产量，是植物的重要的生理指标，与植物胁迫响应、逆境和衰老密切相关，也可以反应植物的生长发育情况。
基于朗伯比尔定律（Beer-Lambert Law ），使用分光光度计可以测量叶绿素提取液在固定波长的吸光度，进而通过公式计算得出叶绿素含量。
朗伯比尔定律测定有色溶液的吸光度计算公式：
A = kcL
A：吸光度
k：比例常数
c：溶质浓度
L：叶层厚度
当溶液浓度为百分浓度单位，叶层厚度为1cm时，k为该物质的比吸收常数。依据不同的物质的不同波长的比吸收系数，可以测定已知浓度的纯物质在不同波长的吸光度。
测定叶绿素a（Ca），叶绿素b（Cb）和类胡萝卜素（Cx）的波长吸光度，可以通过公式计算得到Ca、Cb、Cx和叶绿素总浓度（Ct = Ca + Cb）的浓度。
2. 80%丙酮提取液
已知80%丙酮提取液中Ca、Cb的最大吸收峰在663nm和645nm，根据比吸收系数：
A663 = 82.04 * Ca + 9.27 * Cb (单位：mg/L)
A645 = 16.75 * Ca + 45.6 * Cb (单位：mg/L)
求解上面的两个公式：
Ca = 12.72 * A663 - 2.59 * A645
Cb = 22.88 * A645 - 4.67 * A663
Ct = Ca + Cb 或者 Ct = A652*1000/34.5
Lichten-thaler等对Arnon的方法进行修正：
Ca = 12.21 * A663 - 2.81 * A646
Cb = 20.13 * A646 - 5.03 * A663
Cx = (1000 * A470 - 3.27 * Ca - 104 * Cb)/229
此时使用的是80%丙酮，吸光度分别为：663,646,470。
3. 95%以纯提取液
使用95%以纯提取液，Ca、Cb和Cx的最大吸光度分别为：
665,649和470nm
Ca = 13.95 * A665 - 6.88 * A649
Cb = 24.96 * A649 - 7.32 * A665
Cx = (1000 * A470 - 2.05 * Ca - 114.8 * Cb)/245
最终，叶绿素含量计算公式为：
叶绿素含量（mg/g）= （色素浓度 mg/L * 提取液体积 ml * 稀释倍数）/(1000 * 样品鲜重 g)
通常操作选取的叶片大概为0.1g，剪碎放入装有5ml 95%以纯的10ml离心管中，暗处理24h，即可测量其吸光度。
参考：
植物生理学实验指导
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