荧光共定位定量分析的三大要点。
① 散点图
② 皮尔逊相关系数
③ 重叠系数(也称为共定位系数)
皮尔逊相关系数和重叠系数其实是Image Pro Plus根据散点图进行回归分析计算得到的。
因此,解读散点图成为重中之重,也是发表论文时必须报告出来的。
▼ 1.为什么要分析散点图?
其实最开始定量分析共定位是采用划线法。
IPP把人为划定的线条上的红色通道、绿色通道强度值转换为波形图(如下)。
很快,大家注意到这条人为划定的线不靠谱,线段的位置和长短不同,右侧的波形肯定也会变化。这种局部测量波形图给造假者留下了空间。
于是,散点图出现了。
将整张图中所有荧光点纳入,分离为红色通道和绿色通道,然后根据两个通道的强度(也就是灰度)生成散点图,并计算相关系数。
这样就造不了假,只要图片不变,散点分布是无法被人为操纵。